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高速逆流色譜是連續(xù)液-液分配色譜

2010-12-23

高速逆流色譜
高速逆流色譜是連續(xù)液-液分配色譜，其固定相通過重力場和離心力作用保留在分離柱內(nèi)，而流動相按液-液分配色譜的原理將要分離、制備的組分一一帶出色譜柱外檢測并收集。高速逆流色譜避免了固定相對被分離組分理化性質(zhì)的影響，也避免了不可逆吸附。
利用高速逆流色譜可從粗制品中一步制備獲得高純度單體，適合用于工業(yè)上大規(guī)模制備。也可廣泛用于生化工程、醫(yī)藥、天然產(chǎn)物、環(huán)境分析、食品等到領域中的微量分析。
聚四氟乙烯管纏繞在支架上形成多層螺旋管做分離管，共有三個分離管串聯(lián)在一起，分離管由自轉(zhuǎn)軸控制轉(zhuǎn)速，而三個分離管又共同安裝在帶有公轉(zhuǎn)軸的主機上。主機公轉(zhuǎn)軸的轉(zhuǎn)速可與自轉(zhuǎn)軸的轉(zhuǎn)速相同或不同。調(diào)節(jié)公轉(zhuǎn)軸的轉(zhuǎn)速和自轉(zhuǎn)軸的轉(zhuǎn)速使分離柱內(nèi)固定相和流動相達到平衡后，就可進樣到色譜系統(tǒng)中分離。
高速逆流色譜分離原理：在B點主機公轉(zhuǎn)的離心力與3根分離管自轉(zhuǎn)的離心力方向相反，流動相與固定相混合在一起，固定相和流動按分配原理分配樣品中的組分。
高速逆流色譜旋轉(zhuǎn)時影響固定相在分離管中的保留率，保留率越高分離效果越好。
             固定相占分離管的總?cè)莘e-排出的固定相體積
      保留率=────────────────────
                  固定相占分離管的總?cè)莘e
進入分離管流動相流動的方向可與主機轉(zhuǎn)動的方向相同或相反。兩者的方向相同，或者主機反方向轉(zhuǎn)動，而流動相正方向流動，固定相保留率高，分辨率也高。同時，固定相的保留率與主機轉(zhuǎn)速和流動相的流速也有很大的關(guān)系。
高速逆流色譜對混合樣品中組分的有交分離依賴于樣品各組分分配系數(shù)的差異。影響組分分配的因素很多，也包括洗脫液體第的組成、pH值、離子強度等。在蛋白質(zhì)的分離中，pH值的影響大。
應用pH9.2的聚乙二醇2000-磷酸鹽體系分離細胞互C、血紅蛋白和溶菌酶。3種蛋白質(zhì)按照其分配系數(shù)的大小按順序流出。細胞互C和溶菌酶的Rs達到1.5,而血紅蛋白分配系數(shù)大，基本上完全分配在固定相中，難以被洗脫。在前兩咱蛋白質(zhì)被完全洗脫后，以固定相反向流動洗脫血紅蛋白。顯示出因反相流動洗脫會帶出部分流動相，色譜基線線波動較大。